Editorial

39ème Congrès

Soutenance de thèses

Hommages

Focus sur...

Directeur de publication : Christian Vivarès - Rédaction : Geneviève Milon

 Le troisième millénaire a commencé depuis quelques semaines, il est affirmé partout que ce sera celui de la Biologie. Après un siècle de Physique reine, aurons-nous l'ambition et la volonté de nous affirmer comme des chefs de file de la Recherche? Il s'agit, sans aucun doute, d'un véritable défi intellectuel qui consiste à justifier les espoirs d'acquérir, d'une façon réfléchie, la maîtrise du vivant. La plus grande révolution est que  la Recherche en Biologie change vraiment de dimensions. L'afflux de données, issues du traitement "industriel" des génomes, a pour conséquence une autre façon d'aborder les sujets. L'outil bioinformatique, encore mal maîtrisé, doit être apprivoisé afin de définir de nouvelles stratégies de recherche. Le chemin menant à la paillasse peut être plus long mais beaucoup plus fructueux. L'idée d'interdisciplinarité, évoquée depuis plusieurs décades mais très peu concrétisée, reprend vigueur sous l'impulsion des décideurs institutionnels, qu'en ferons-nous?

 La parution de ce "GPLF-info" a été retardée et je vous prie de m'excuser. Certains devaient se demander ce qu'il en était des échéances des différents congrès et réunions des Protistologues. L'année 2001 sera, pour les Protistologues, l'année du changement pour les tenues de ces congrès.

 Tout d'abord, pour ce qui est du GPLF, nous souhaitions réaliser des rencontres avec des scientifiques d'autres sociétés, souhait partagé puisque le nombre de congrès communs augmente significativement. Après de nombreuses discussions, notre choix s'est arrêté sur la Société Française des Microscopies. Or, cette année son congrès a lieu à Barcelone dans un grand congrès "européen" avec trois autres sociétés, celles des microscopies espagnole et portugaise, et la société espagnole de Biologie cellulaire. Les organisateurs ont accepté que nous nous joignons à eux. Ceci a entraîné le déplacement de la date de notre 39ème réunion de mai au début septembre (3-7). Outre le changement de date, le choix de l'anglais comme langue officielle de travail peut en choquer certains mais il nous a été réservé deux demi-journées qui seront donc en langue française, ce qui est le moins pour notre GPLF; des communications orales et deux symposiums (en cours de réalisation) y prendront place. Vous trouverez plus bas des indications pour les pré-inscriptions qui seront centralisées à Barcelone. Venez nombreux afin de bien commencer, dans un contexte européen, la prochaine année universitaire!
 Le congrès international ICOP XI ne pourra pas se dérouler à Jérusalem; ses organisateurs ont trouvé comme nouveau lieu: Salzbourg (Autriche) du 15 au 19 juillet 2001. Ceci devrait encourager certains hésitants à y participer. La plupart d'entre vous ont reçu directement les informations. Ne pas oublier que la date de soumission des résumés est le 15 mars! Il est à noter que le GPLF n'a pas été officiellement associé à cette organisation.

 Afin, d'inciter nos jeunes collègues à participer à notre réunion du GPLF, quelques bourses de participation aux frais, sur justifications, seront accordées. Prière d'en faire la demande, accompagnée d'un résumé de la communication ou de l'affiche. Pour différentes raisons, l'an passé nous n'avions pu concrétiser l'idée du prix "Jeune chercheur". Comme nous disposons d'un délai supplémentaire, nous pourrons cette année l'attribuer, il honorera la meilleure communication (orale ou affiche) d'un (e) jeune chercheur (se) (âge limite: 33 ans). Il faudra nous adresser, avant la date limite du 1er juillet, le texte complet de la communication ou de l'affiche, avec les illustrations.

 Je vous rappelle que les abstracts seront publiés dans "The Journal of Eukaryotic Microbiology", premier numéro de l'année 2002, mais qu'ils seront sur le serveur du GPLF et sur celui de la Society of Protozoologists. Les textes de ces abstracts devront nous parvenir, sous forme électronique, avant le 1er  Octobre 2001.

 Ce numéro, GPLF Info 9, à la fois sous les formes papier et électronique, est envoyé aux adhérents, et aux non-adhérents afin qu'ils nous rejoignent. Prière de renouveler votre adhésion ou d'adhérer rapidement. Merci.

 Bon et fructueux travail à tous afin que la Protistologie conserve une place de choix dans les disciplines biologiques. Bien cordialement.

      Christian VIVARES

La 39ème Réunion Annuelle du GPLF aura lieu du 3 au 7 Septembre 2001 à l'université de Barcelone (Espagne, Catalogne). Cette réunion se déroulera dans le cadre du Congrès “Microscopie à Barcelone” organisé conjointement par la Société Française des Microscopies, la Sociedad de Microscopía de España et la Sociedade Portuguesa de Microscopia Electronica ainsi que la Sociedad Española de Biologia Celular.

Le matin sont programmées des sessions de microscopie et biologie cellulaire, et l'après-midi des sessions consacrées aux domaines suivants : la microscopie appliquée à la science des matériaux, les applications biologiques de la microscopie et biologie cellulaire, et les nouvelles microscopies.

Certaines communications de nos membres trouveront facilement leur place dans les sessions ci-dessous détaillées. De plus, nous aurons à notre disposition 2 demi-journées en Langue française. Elles seront consacrées à 2 symposiums (en cours d'organisation) ainsi qu'à des communications orales.

A titre indicatif, ci-dessous sont indiqués les thèmes qui devraient être abordés lors du Congrès "Microscopie à Barcelone":

Conférences plénières:
·  Faire de la physique avec des molécules biologiques
·  La science au service de l'art

Sessions communes de microscopie:
·  Images numériques
·  Techniques nouvelles et améliorations en microscopie

Sessions communes de biologie cellulaire
·  Mort cellulaire
·  Signaux cellulaires
·  Biologie cellulaire moléculaire du cancer

Symposiums sur l'application de la microscopie aux matériaux:
·  Catalyseurs, amas et petites particules
·  Céramiques, composites et matériaux magnétiques
·  Défauts et oxydes sous-stoechiométriques
·  La microscopie électronique appliquée à la géologie, à l'archéologie et  à l'art
·  Microscopies in situ
·  Nanomatériaux

Symposiums de SPM et nouvelles microscopies:
·  Applications de la microscopie de forces atomiques en biologie
·  Propriétés physico-chimiques de surfaces étudiées sous SPM

Symposiums de biologie cellulaire et applications biologiques de la
microscopie:
·  Développement animal et végétal
·  Adhésion cellulaire
·  Compartiments cellulaires
·  Cryopréparation pour la microscopie électronique et cryoanalyse
·  Cytosquelette
·  Matrice extracellulaire
·  Cellules germinales
·  Transport intracellulaire
·  Microscopie de cellules vivantes
·  Neurobiologie
·  Noyau et expression génique
·  Marquage et suivi de molécules
·  Tomographie de cellules et molécules

Ateliers:
Pour l'heure, deux ateliers, subventionnés par Leica Microsystems, sont programmés. d'autres, indépendants, sont prévus. Ils couvriront divers aspects de science des matériaux et nouvelles microscopies.
·  Tendances en microscopie confocale et de fluorescence
·  Méthodes cryogéniques d'identification moléculaire in situ

FRAIS D'INSCRIPTION:

Congrès:
Membres des Sociétés organisatrices: 150 Euros. Etudiants: 80 Euros.
Non membres des Sociétés organisatrices: 200 Euros.

Ateliers:
Membres des Sociétés organisatrices: 60 Euros.
Non membres des Sociétés organisatrices: 80 Euros.

Pour les internautes, le site internet est: http://xps.sct.ub.es Vous y trouverez toutes les informations et les formulaires de pré-inscription.

Les pré-inscriptions doivent être faites le plus rapidement possible, en remplissant la fiche jointe  et en l'adressant directement aux organisateurs à Barcelone. Ce serait utile de nous en envoyer une copie.
<-------- Cliquez ici pour la fiche d'inscription

 Jean Théodoridès, Théo pour ses familiers, est décédé subitement au seuil de l'année 2000.
 Né à Paris, le 11 juin 1926, il vécut dans un environnement familial cosmopolite, comptant des médecins, des scientifiques et des artistes de renom. Sa formation universitaire acquise à la faculté des sciences à Paris fut complétée par un PhD, à l'université Harvard aux États-Unis. Théo qui, dès son enfance se passionnait pour les coléoptères, s'initia à la recherche en tant que chercheur bénévole au laboratoire d’Entomologie du Muséum d’Histoire naturelle et au cours de stages effectués dans les stations marines de Roscoff et de Banyuls comme à la station de parasitologie de Richelieu. Il soutint en 1950, à Paris, une thèse de Doctorat ès-Sciences consacrée aux parasites et phorétiques de coléoptères; il était également titulaire d’un Doctorat en Lettres.

Entré au CNRS en 1949, il effectua la majeure partie de sa carrière au laboratoire d'Évolution des Etres Organisés. Pendant plus de trente ans, il y poursuivit l’étude des grégarines, classe des Apicomplexa exclusivement représentée chez les invertébrés. Il restera le spécialiste mondial de ces protozoaires parasites auxquels il a consacré près de 100 publications. Ses premiers travaux sur les grégarines furent guidés par Odette Tuzet et sa collaboration avec l'école de Montpellier se concrétisa par des articles publiés avec René Ormières notamment. Avec Pierre-Paul Grassé, Théo entreprit en 1955 l'étude des grégarines en microscopie électronique et c'est ce matériel qui révéla la présence de l’ergastoplasme chez les protozoaires.

Les récoltes effectuées sur le terrain, par lui-même et ses collaborateurs, élèves et collègues entomologistes, dans tous les continents et dans les biotopes les plus divers, fournirent un matériel exceptionnel donnant lieu à la description à de nouveaux taxons chez des hôtes aussi variés que les myriapodes, orthoptères ou coléoptères. Théo s’intéressait également à la faune parasitaire marine. Il étudia surtout le matériel récolté en Méditerranée lors de séjours effectués dans les stations de Banyuls et de Villefranche. Il effectua également une mission à la station marine de Nanaimo au Canada et participa en 1975 à une campagne du navire océanographique Jean Charcot, dans l’Atlantique nord. L'examen des spécimens prélevés au cours de cette mission lui apporta la confirmation que les représentants primitifs du phylum des Apicomplexa se trouvent chez les vers marins. Fait également significatif, les grégarines trouvées chez des annélides  polychètes hébergeaient elles-mêmes des formes archaïques du phylum des Microspora. L’oeuvre protozoologique de Jean Théodoridès, représentée par près de 100 publications, constitue donc une source d’informations et de pistes de recherches potentielles pour le phylogénéticien.

Parallèlement à ces recherches, il fit oeuvre d’historien des sciences biologiques et médicales. Il est l’auteur de plusieurs livres dont une Histoire de la zoologie des origines à Linné, écrite avec Georges Petit, l’Histoire de la Rage qui lui valut un prix de l’Académie des Sciences en 1986 et un ouvrage intitulé “Des miasmes aux virus” édité en 1991 chez Pariente. C'est au début de l'an 2000 qu'est paru la 7ème édition de son Histoire de la Biologie, dans la célèbre collection “Que sais-je ?”.

 Il participait activement à la vie de nombreuses sociétés savantes. Directeur de recherche au CNRS, il fut le premier président non médecin de la Société Française d’Histoire de la Médecine. Il était membre de la Royal Society of Medicine. Il participa également à de nombreuses réunions du GPLF. La dernière à laquelle il assista fut celle que j'organisais avec Annick Datry à Paris en 1997. Par son érudition et son goût pour la musique notamment, Théo évoquait l’honnête homme au sens du 18ème siècle. Nous en gardons le souvenir d'un ami spirituel, sensible, qui captivait son auditoire par mille anecdotes et l'évocation de parasitologistes et biologistes éminents comme Emile Brumpt, Hervé Harant, Georges Petit, Odette Tuzet, Robert-Philippe Dollfus, Pierre-Paul Grassé, Jean Rostand...

Isabelle Desportes
INSERM U511, Pitié Salpêtrière, Paris

 Lors de sa réunion du 23-26 Mai 2000, la présentation d'un vidéogramme sur la morphogenèse de la lorica par Jean-Pierre Mignot, dans l'auditorium de la grande galerie du Muséum, fût l'occasion pour le GPLF de rendre un hommage particulier à I. Raïkov.
 Ce rappel de la disparition à l'âge de 66 ans, d'un des plus actifs membres correspondants du GPLF fut d'autant plus émouvant qu'il se déroula en présence de Catherine, son épouse, et d'Olga, sa fille.

 Connu de toute la communauté scientifique internationale pour ses travaux sur les noyaux des ciliés et ses publications sur l'ultrastructure du noyau des protistes, Igor Raïkov (1932-1998) voulait compléter l'oeuvre de Belar, trop vite oubliée à son avis. Élève de Dogiel puis de Poljansky, il s'était beaucoup dépensé pour promouvoir la protistologie russe.
 Pratiquant avec une grande aisance les langues vivantes, en particulier l'Anglais l'Allemand et le Français, qu'il avait commencé à apprendre dès son plus jeune âge, il savait parfaitement comment s'intégrer parmi les protistologues du monde entier. Sauf empêchement pour des conditions matérielles de voyage et de séjour, il ne manquait jamais un congrès, y présentait des communications et présidait des séances.

 Il aimait particulièrement venir en France où il comptait beaucoup d'amis. Depuis 1970, il a effectué divers stages à Clermont-Ferrand, passant de longues journées à observer au microscope électronique . Mais il n'oubliait jamais d'aller visiter les laboratoires d'Orsay, Roscoff, Banyuls, Villefranche sur Mer, Montpellier, pour récolter du matériel, apprendre de nouvelles techniques et discuter de ses résultats. Il s'efforçait toujours de faire coïncider son séjour avec les réunions du GPLF, occasion de retrouver tous ses amis.

 L'éducation reçue au contact de ses parents et de leurs amis, intellectuels et artistes de grande renommée, l'avait sensibilisé à l'art sous toutes ses formes. il ne voyageait jamais sans son appareil photo et sa caméra, façon de conserver la trace de ce qu'il avait admiré et de le faire connaître à sa famille et ses collègues russes moins favorisés pour voyager. Vous avez tous constaté avec quel empressement il sortait son appareil pour vous photographier dès qu'il pénétrait dans votre laboratoire. Et, si bien vite il vous renvoyait les clichés, c'était sa façon coutumière d'exprimer sa gratitude.

 Ayant fait sa connaissance en 1965, au congrès de Londres, notre amitié n'a fait que se renforcer d'année en année. Par son aisance d'expression en Français, peut-être aussi par quelques ressemblances de physique et de caractère il nous est arrivé, lors de visites au coeur de l'Auvergne et du Limousin d'être reçu comme deux frères. Alors vous comprendrez combien je suis sensible d'avoir été l'interprète du GPLF pour lui rendre hommage en cette occasion.

 Jean-Pierre Mignot

Auteur:   André BOUCHOT
Lab: UPRESA CNRS 2070, UNIV. REIMS CHAMPAGNE ARDENNE (Dir. Thèse: A. Bonhomme, P. Bonhomme) Date: 13.01.1999.
Invasion parasitaire par T. gondii: étude du signal calcique, des réserves calciques et de l'activité Ca-ATPasique

Toxoplasma gondii est le protozoaire parasite responsable de la toxoplasmose dont le développement obligatoirement intracellulaire implique une adaptation à un environnement de composition chimique ionique différente de celle du milieu extracellulaire. Le calcium étant un messager extracellulaire ubiquiste, nous nous sommes demandés s'il y avait émission d'un signal calcique lors de l'invasion parasitaire, dans la cellule-hôte ou le parasite, par quel moyen le parasite régule sa concentration cytosolique de calcium et dans quel (s) compartiment (s) il pourrait stocker son calcium. Par l'utilisation de chélateurs et d'inhibiteurs de canaux calciques, il est montré qu'un influx calcique permet l'activation du parasite. D'autre part, la mobilisation du calcium des réserves parasitaires et cellulaires apparaît impliquée dans l'émission d'un signal calcique lors de l'invasion et une modification de la concentration cytosolique en calcium inhibe fortement l'entrée du parasite. Chez T. gondii, la maîtrise des flux calciques est donc à la base même de la capacité à envahir des cellules-hôtes. Il semble que cette maîtrise soit assurée, tout au moins en partie, par une pompe Ca2+, Mg2+-ATPase dont l'activité est de l'ordre de 2-4 mmol de Pi.mg protéine-1.min-1. Cette pompe a été localisée, par cytochimie et immunomarquages, au niveau des membranes du parasite (complexe membranaire, membranes du noyau, rhoptries et granules denses). Cette pompe pourrait être aussi localisée dans un organite spécialisé dans le stockage du calcium. Il a été possible de localiser et d'identifier cet organite en étudiant des échantillons cryopréparés (cryofixés, cryocoupés et lyophilisés) par microscopie électronique et par spectrosocopie des énergies des photons X. Cet organite dénommé "granule noir" correspondrait aux acidocalcisomes décrits chez certains protozoaires parasites qui piègent le calcium pompé en échange de protons, au moyen d'ions phosphates eux-mêmes accrochés à une structure biochimique (très probablement un oligosaccharide). Ce calcium est mobilisé au cours du développement intracellulaire. Les concentrations des ions Na+, Cl- et K+ dans les tachyzoïtes varient au cours de l'internalisation, ainsi que P lié à la réplication de l'ADN, et S lié à la variation du contenu protéique des rhoptries et granules denses. Les résultats de spec-troscopie X ont montré qu'au cours du développement intracellulaire du parasite, la concentration cytosolique en potassium dans les cellules infectées augmente et l'hypothèse d'une variation du potentiel de membrane de la cellule a été émise. Cette hypothèse a été vérifiée par microspectrofluorométrie et l'étude des spectres a démontré que le potentiel de membrane diminue au cours de l'infection. Parallèlement, les résultats de spectroscopie X ont montré que l'augmentation des concen-trations en P et en S dans le noyau des cellules infectées pourrait être liée à une activation de la transcription. Nos résultats montrent que le signal calcique est un facteur déterminant dans la transduction intra- et intercellulaire et mettent en évidence les phénomènes ioniques au cours de l'invasion parasitaire.
BOUCHOT A., ZIEROLD K., BONHOMME A., KILIAN L., BELLONI A., BALOSSIER G. PINON JM., BONHOMME P. 1999. Tachyzoite calcium changes during cell invasion by Toxoplasma gondii . Parasitol. Res. , 85, 809-818.
BONHOMME A., BOUCHOT A., PEZELLA N., GOMEZ J., LE MOAL H., PINON J.M. 1999. Signaling during the invasion of host cells by T.gondii. FEMS Microbiol Rev., 23, 551-61

Auteur: Mariama IDRISSA BOUBOU
Lab.: INSERM U511, Immunobiologie cellulaire et Moléculaire des Infections Parasitaires CHU Pitié-Salpêtrière. PARIS (Dir. Thèse: D. Mazier). Date: 30.06.1999
Étude du répertoire des lymphocytes T sélectionnés par les antigènes dePlasmodium berghei ANKA: rôle de ces populations cellulaires dans la genèse du neuropaludisme murin.

Dans le cadre de l’étude des mécanismes pathologiques conduisant au développement du neuropaludisme, nous nous sommes intéressés à la réponse immune des lymphocytes T induite par les antigènes plasmodiaux.
- La première étape de la recherche a consisté à définir un modèle expérimental d’infection de différentes souris avec Plasmodium berghei ANKA (PbA). Nous avons démontré que: 1) plusieurs clones de PbA diffèrent par leur capacité à induire une pathologie cérébrale, 2) le développement du neuropaludisme est fonction du fond génétique mais indépendant de l’haplotype des souris.
- Dans une deuxième étape, le rôle des lymphocytes Tab dans la genèse de la pathologie cérébrale a été démontré en utilisant des souris déficientes pour les récepteurs des lymphocytes ab et gd  (TCR ab et TCR gd) infectées avec le clone 1.49L de PbA. Les souris TCR gd-/- sont sensibles au paludisme cérébral alors que les souris TCR ab-/ - résistent à la pathologie.
- Dans une troisième étape, nous avons mis en évidence, par cytométrie en flux, une augmentation significative des cellules périphériques TCR CD3+ Vb8.1,2+ en association avec la sévérité du syndrome neurologique, dans notre modèle d’infection de souris C57BL/10.D2 avec le clone 1.49L de PbA. L’augmentation de ces cellules activées/mémoires, car exprimant le phénotype CD69+, CD44high et CD62Llow, est observée dans les deux sous-populations de lymphocytes T CD4+ et CD8+. Leur implication dans la pathologie du neuropaludisme est confortée par la réduction de l’incidence de la maladie chez: 1) des souris C57BL/10.D2 rendues déficientes en cellules TCR CD3+ Vb8.1,2+ par injection d’anticorps anti-Vb8.1,2 (KJ16) aux nouveau-nées et 2) des souris BALBD2 Mls1a et BALB.SW déficientes en cellules TCR Vb8.1+  par intégration dans leur génome d’un virus superantigène mammaire de souris.
Des immunomarquages intracellulaires ont montré que ces cellules TCR CD3+ Vb8.1,2+ sécrètent de l’IFN-g et du TNF-a, deux cytokines pro-inflammatoires dont l’implication dans les mécanismes pathologiques du neuropaludisme expérimental a déjà été démontrée. L’histopathologie du cerveau et de la moelle épinière des souris atteintes de neuropaludisme a révélé une margination de leucocytes à l’intérieur des vaisseaux sanguins, l’extravasation vasculaire d’érythrocytes, des hémorragies et des oedèmes périvasculaires ainsi qu’une activation des astrocytes localisée au niveau de ces lésions. Par la technique immunoscope qui permet l’étude de la taille de la région hypervariable du segment Vb du TCR des lymphocytes, nous avons trouvé que: 1) l’augmentation des cellules périphériques TCR CD3+ Vb8.1,2+ est de nature polyclonale, 2) plusieurs autres cellules périphériques T sont sélectionnées au cours du neuropaludisme et 3) pour un même animal manifestant des symptômes neurologiques profonds, la diversité du répertoire TCR Vb observée dans le sang est retrouvée dans le cerveau.

MAZIER D., NITCHEU J., IDRISSA-BOUBOU M. 2000. Cerebral malaria and immunogenteics. Parasite Immunol.,22, 613-623.

Auteur: Nathalie PEZZELA-D'ALESSANDRO
Lab.: UPRESA CNRS 2070, UNIV. REIMS CHAMPAGNE ARDENNE (Dir. Thèse: A. Bonhomme). Date: 28.09.1999.
Détection, caractérisation de la calmoduline de Toxoplasma gondii. Implication de la calmoduline dans l'invasion parasitaire et interactions avec le complexe acto-myosine du cytosquelette.

Toxoplasma gondii, protozoaire responsable de la toxoplasmose, est un parasite intracellulaire obligatoire. Chez l'homme, il peut être à l'origine de sérieuses pathologies chez les nouveau-nés et les sujets immunodéprimés. Ce parasite est capable d'infester toutes les cellules nucléées des vertébrés homéothermes. Le processus d'invasion cellulaire par T. gondii est un processus actif qui requiert un rôle dynamique de la part du tachyzoïte: motilité cellulaire, protrusion du conoïde, sécrétion et exocytose. La calmoduline (CaM), protéine ubiquiste principal relais du calcium dans la cellule, qui stimule l'activité de nombreuses enzymes et qui intervient dans la régulation des protéines du cytosquelette, a été détectée et caractérisée chez le tachyzoïte de T. gondii. La calmoduline toxoplasmique possède les caractéristiques communes qui définissent toute calmoduline: c'est une protéine de 17-18 kDa, thermostable, calcium-dépendante, capable de stimuler l'activité enzymatique de la phosphodiestérase. Sa composition en acides aminés présente le plus d'homologie avec celles de la levure Saccharomyces cerevisiae et de Candica albicans. L'implication de la calmoduline parasitaire dans le processus d'invasion a été démontrée après le traitement des tachyzoïtes par des inhibiteurs de CaM (triflupérazine, calmidazolium), qui provoquent une diminution de l'index d'infection de 30%. La calmoduline de T. gondii a été localisée par immunofluorescence et apparaît concentrée au pôle apical du parasite extracellulaire. Après internalisation du tachyzoïte et réplication intracellulaire, une légère délocalisation le long du complexe membranaire est observée. L'accumulation de la calmoduline au pôle apical, siège des principaux événements responsables de l'invasion, a conduit à orienter notre recherche vers l'étude des protéines du cytosquelette (actine et myosines), protéines régulées par la CaM. L'observation de ces protéines en microscopie confocale et la reconstruction 3D des immunomarquages, révèlent que l'actine, les myosines et la calmoduline sont étroitement liées au pôle apical du parasite. Ces résultats montrent une distribution apicale de l'actine majoritairement sous-membranaire en forme de "V", une répartition apicale des myosines principalement périphérique et plus légèrement centrale et enfin une localisation tout à fait centrale de la calmoduline au pôle apical. Or, la calmoduline n'intervient pas directement sur le complexe acto-myosine. La mise en évidence de kinases de chaînes légères de myosines (MLCK), une des principales molécules servant d'intermédiaire entre le complexe acto-myosine et la calmoduline, également au pôle apical du parasite a permis de confirmer l'interaction et l'intervention de la calmoduline sur le complexe acto-myosine du cytosquelette chez le tachyzoïte de T. gondii.
Nos résultats mettent en évidence l'existence de la calmoduline chez T. gondii, ses relations spatiales avec les protéines du cytosquelette au niveau du conoïde et son implication dans l'invasion parasitaire.

PEZELLA N., BOUCHOT A., BONHOMME A., PINGRET L., KLEIN C., BURLET H., BALOSSIER G., BONHOMME P., PINON JM. 1997. Involvement of calcium and calmodulin in Toxoplasma gondii tachyzoite invasion. Eur. J. Cell. Biol., 74, 92-101.

Auteur: Annie BELLONI
Lab.: UPRESA CNRS 2070, UNIV. REIMS CHAMPAGNE ARDENNE (Dir. Thèse: M. Guénounou, J.M. Pinon). Date: 17.12.99
Contribution à l'étude du TNF-a et de ses récepteurs dans le processus d'invasion cellulaire de Toxoplasma gondii ; implications des protéases parasitaires.

Toxoplasma gondii est un protozoaire parasite intracellulaire obligatoire responsable de la toxoplasmose, capable d'infester toutes les cellules nucléées des homéothermes. Chez l'homme, il peut être à l'origine de pathologies sévères chez les nouveau-nés. Le processus d'invasion cellulaire de T. gondii est une étape essentielle au développement de l'infection. A l'heure actuelle, il est reconnu que l'infection par T. gondii induit une forte immunité à médiation cellulaire, caractérisée par une réponse très polarisée Th1. L'immunothérapie de la toxoplasmose est, à ce jour, pressentie comme une alternative intéressante aux traitement médicamenteux actuels. Ainsi, l'étude du TNF-a (cytokine Th1) et de ses récepteurs au cours du processus invasif de T. gondii nous a conduit à aborder le rôle du TNF-aendogène et exogène, ainsi que l'implication de ses récepteurs au cours du processus d'invasion cellulaire de T. gondii dans la lignée monocytaire THP-1, et de rechercher l'implication de protéases parasitaires. Puis, nous avons étudié la régulation par T. gondii du TNF-a et de ses récepteurs, d'une part par la voie de signalisation de l'AMPc impliquant les PKA cellulaires et, d'autre part, au niveau transcriptionnel par RT-PCR.
Nous montrons que le TNF-a a réduit significativement l'invasion cellulaire sans affecter la multiplication intra-cellulaire du parasite et que, contrairement à ce qui est décrit chez la souris, T. gondii inhibe la production de TNF-a par les cellules monocytaires humaines THP-1. Le processus d'invasion induit le relargage du domaine extracellulaire du récepteur de type I du TNF-a , sans affecter celui du récepteur de type II. Une activité de type sérine protéase est impliquée dans le processus invasif de T. gondii , d'une part, et dans la solubilisation du domaine extracellulaire du récepteur de type I du TNF-a, d'autre part. Cette activité protéolytique est inhibée par une pré-traitement des tachyzoïtes par l'AEBSF (inhibiteur spécifique des protéases). Enfin, l'antigène majeur de surface P30 de T. gondii, purifié par chromatographie d'immunoaffinité, pourrait présenter une activité de type sérine protéase. T. gondii induit une production d'AMPc cellulaire en réponse au processus d'invasion cellulaire. En outre, l'AMPc est impliqué dans l'invasion parasitaire et il est responsable de l'activation des PKA cellulaires. L'inhibition des PKA cellulaires, en présence de T. gondii ne restaure pas la sécrétion de TNF-a cellulaire en présence de T. gondii. Aucune sécrétion d'IL-10 par les cellules THP-1 infectées n'est détectée, cette cytokine ne semble donc pas responsable de la régulation du TNF-a par le parasite dans notre modèle d'infection. Lors du processus invasif de T. gondii, la quantité de transcrits TNF-a  dans les cellules THP-1 augmente de façon significative. Ceci indique que le parasite régule la production de TNF-a à un niveau post-transcriptionnel. Une diminution de la transcription génique de P55 ainsi qu'une augmentation de la transcription génique de P75 sont mises en évidence dans la lignée cellulaire THP-1 au cours du processus invasif de T. gondii.

BELLONI A., AUBERT D., GOMEZ MARIN J.E., LE NAOUR R., BONHOMME A., GUENOUNOU M., PINON J.M. 2000. Involvement of tumor necrosis factor-alpha during infection of human monocytic cells by Toxoplasma gondii. Parasitol. Res. 86, 406-412

La microsporidie Encephalitozoon cuniculi, parasite intracellulaire amitochondrial possède, avec 2,8 Mpb, l'un des plus petits génomes nucléaires. Ses 11 chromosomes de taille s'échelonnant de 210 à 302 kpb font l'objet d'un séquençage systématique en collaboration avec le CNS-Génoscope (Evry). Dans ce cadre, une carte physique de ce génome a été construite, grâce à l'utilisation combinée de nouvelles techniques de marquage radioactif d'ADN génomique et de 2-D PFGE. Le KARD-PFGE ("Karyotype And Restriction Display") et le DDIC-PFGE ("Double Digestion of Isolated Chromosomes"), mis au point sur le génome de la levure Saccharomyces cerevisiae, ont permis l'élaboration d'une carte de restriction des 69 sites BssHII et des 70 sites MluI du génome de l'isolat de référence d'E. cuniculi provenant de souris (résolution inférieure à 20 kpb). De plus, 67 STS ("Sequenced Tag Sites") représentant près de 50 kpb ont été attribués à des fragments de restriction BssHII et MluI. Ce génome présente la caractéristique de posséder à chacune des extrémités chromosomiques une unité ADNr. Cette propriété a été mise en évidence pour les trois souches d'E.cuniculi décrites à ce jour, chez plusieurs variants caryotypiques (type A, C, D et F). Deux isolats de la même souche I et issus de lapins, mais différant par le caryotype (A et C) ont été génomiquement comparés par le KARD-PFGE. Il est déduit que les régions subtélomériques sont le lieu de réarrangements chromosomiques menant à des différences de taille entre chromosomes homologues d'un même variant, et entre mêmes chromosomes des deux variants.

BRUGERE J.F., CORNILLOT E., METENIER G., VIVARES C.P. 2000. Encephalitozoon cuniculi (Microspora) genome: physical map and evidence for telomere-associated rDNA units on all chromosomes. Nucl. Acids Res., 28, 2026-2033.
BRUGERE J.F., CORNILLOT E., METENIER G., VIVARES C.P. 2000. In-gel DNA radiolabeling and two-dimensional pulsed field gel electrophoresis procedures suitable for fingerprinting and mapping small eukaryotic genomes. Nucl. Acids Res., 28, e48..
BRUGERE J.F., CORNILLOT E., METENIER G., VIVARES C.P. 2000. Occurence of subtelomeric arrangements in the genome of the microsporidian parasite Encephalitozoon cuniculi, as revealed by a new fingerprinting procedure based on two-dimensional pulsed field gel electrophoresis. Electrophoresis, 21, 2576-2581.

Auteur: Isabelle DENANTES-VERDIER
Lab.: Microbiologie des Fermentations, ISA, LILLE (Dir. Thèse: J. De Coninck, S. Bouquelet). Date: 12.10.2000.
Étude des potentialités industrielles de Tetrahymena thermophila BIII: produc-tion en masse et contribution à la caractérisation de l'activité protéasique.

Tetrahymena thermophila  BIII est un protozoaire cilié présentant de bonnes aptitudes à la culture en masse. Dans un premier temps, l'utilisation du fermenteur s'avère être le mode de culture le plus intéressant pour la production en masse de T. thermophila: Le temps de génération (TG) est amélioré de 30%  et la population maximale (PM) de 80%. Après comparaison de six milieux complexes contenant tous de l'extrait de levure, le milieu MYE se révèle le plus performant en fermenteur. Le pH optimum de croissance est de 6,8. La régulation de la fermentation à ce pH ne permet pas d'améliorer le TG et la PM, mais favorise un allongement de la phase stationnaire. La régulation de l'oxygène dissous augmente la production d'activité. Pour accroître la biomasse (jusqu'à 107 cellules/mL) et la sécrétion protéasique, un procédé de culture en continu, avec recyclage des cellules par microfiltration tangentielle a été testé avec succès.
Dans un deuxième temps, trois activités enzymatiques ont été sélectionnées (protéasique, a-amylasique, pullulanasique), parmi les enzymes hydrolytiques testées. La production des activités a-glycosidasiques est favorisée par la présence de glucose dans le milieu de culture (milieu YEG) ; par contre, pour l'activité protéasique, il est plus intéressant de cultiver T. thermophila  sur milieu MYE. C'est cette dernière activité que nous avons retenue pour la suite de notre étude.
Une hétérogénéité quant au pH optimum de l'activité protéasique a été observée, laissant sous-entendre l'existence de plusieurs systèmes enzymatiques différents. Si les premiers résultats obtenus confirment cette hypothèse, d'autres résultats plaident pour une seule entité enzymatique avec deux optima d'activité: l'impossibilité de séparer les deux entités moléculaires, un comportement de cystéine-protéase pour les deux activités, des comportements similaires en électrophorèse. L'influence variable de l'urée sur la vitesse d'hydrolyse suggère que l'urée a une action bénéfique sur l'accessibilité du substrat, et non sur l'enzyme. Cette hypothèse est renforcée par les résultats de l'étude de l'hémoglobine en fluorescence, en présence ou non d'urée et/ou de zinc. Le zinc, fortement inhibiteur à pH 9,0, semble contrebalancer l'effet de l'urée.

Auteur: Laurence DELHAES
Lab.: INSERM U167, INSTITUT PASTEUR, LILLE (Dir. Thèse : D. Dive). Date: 16.11.2000
Activité antimalarique de dérivés ferrocéniques de la quinine, de la chloroquine, de la méfloquine, de la dihydroartémisinine et de la chloroquine.

L'activité antipaludique de dérivés ferrocéniques de la quinine (Q), de la méfloquine (MQ), de la dihydroartémisinine (QHS) et de la chloroquine (CQ) a été criblée sur P. falciparum. Les dérivés de Q et MQ sont moins actifs que les molécules mères. Deux dérivés de QHS montrent la même activité que l'artémisinine. Ces composés se fixent sur la ferriprotoporphyrine IX, confirmant le rôle des adduits QHS-hème dans le mécanisme d'action. La ferrochloroquine (FQ), dérivé de CQ où le groupement ferrocène est inséré au milieu de la chaîne latérale, est l'antipaludéen prometteur qui a focalisé notre recherche. Par analogie à CQ et ses métabolites, les métabolites potentiels de FQ montrent in vitro une activité relative comparable. Les énantiomères (+)-FQ et (-)-FQ sont moins actifs in vivo que le mélange racémique, ce qui peut être expliqué par leur isomérie basée sur une chiralité planaire.
L'activité antipaludique de FQ est 1,5 à 30 fois supérieure à celle de CQ sur P. falciparum in vitro et sur P. vinckei vinckei in vivo. Aucun effet secondaire n'est observé aux doses curatives; la toxicité aiguë du produit semble dépendre de la réplétion gastrique.
P. falciparum devient de plus en plus multi-résistant. Nous avons étudié la capacité de P. yoelii NS à devenir résistant à FQ. Alors qu'une pression CQ induit une résistance modérée à CQ, une pression FQ induit une multirésistance, qui disparaît après relâche de cette pression. La résistance à CQ et FQ est reversée en partie par le vérapamil.
Des mutations, l'amplification et la surexpression de pfmdr1 sont associées à la résistance multiple chez P. falciparum. Nous avons recherché un gène homologue chez P. yoelii NS. Nous avons partiellement identifié et séquencé un gène présent dans tous les phénotypes. Les mutations ponctuelles des nucléotides connues pour être associées à une résistance chez P. falciparum sont absentes chez P. yoelii NS. La comparaison du nombre de copies du gène mdr entre les phénotypes est en cours.

BIOT C., DELHAES L., MACIEJEWSKI L.A., MORTUAIRE M., CAMUS D., DIVE D., BROCARD J.S. 2000. Synthetic ferrocenic mefloquine and quinine analogues as potential antimalarials. Europ J Med Chem, 35, 707-714.
BIOT C., DELHAES L., N'DIAYE C.M., MACIEJEWSKI L.A., CAMUS D., DIVE D., BROCARD J.S. 1999. Synthesis and antimalarial activity in vitro of potential metabolites of
ferrochloroquine and related compounds. Bioorg Med Chem 7,2843-7.
DELHAES L., BIOT C., BERRY L., MACIEJEWSKI L.A., CAMUS D., BROCARD J.S., DIVE D. 2000. Novel Ferrocenic Artemisinin Derivatives: Synthesis, In Vitro Antimalarial Activity and Affinity of Binding with Ferroprotoporphyrin IX. Bioorg Med Chem, 8, 2739-2745

Auteur: Céline BRUZI-BAERT
Lab.: INSERM U42, LILLE et CIRMF, Franceville, Gabon. (Dir. Thèse: D. Dive). Date: 17.11.2000
La superoxyde dismutase des quatre espèces de plasmodies humaines : Analyse phylogénique et structurale.

Au cours de son développement dans l'hématie, Plasmodium falciparum est soumis à un choc oxydant qui peut lui être fatal. Une superoxyde dismutase endogène constitue la première enzyme impliquée dans le système enzymatique antioxydant parasitaire. La nature fer-dépendante de cette SOD la distingue de celles de l'hôte qui sont respectivement manganèse et cuivre/zinc dépendantes, faisant d'elle un candidat potentiel pour un ciblage médicamenteux.
Dans cette perspective, il était important d'étudier le polymorphisme de cette enzyme à partir de souches naturelles circulant en Afrique, puisque jusqu'à présent, les travaux publiés ne concernaient qu'une souche de laboratoire, cultivée in vitro et, par conséquent, n'étaient pas représentatifs de la population parasitaire.
Nous avons étudié la variation génique de cette enzyme à partir de 26 isolats de P. falciparum provenant du Gabon. Il existe une forte conservation du gène entre isolats puisque la majorité des mutations ponctuelles identifiées se situent dans des zones variables de la protéine et ne concernent pas de régions critiques telles que le site actif ou les domaines d'interaction entre les sous unités.
En parallèle, le gène de la FeSOD a été cloné et séquencé chez les 3 autres espèces humaines plasmodiales qui sont P. malariae, P. ovale et P. vivax. On note également une forte conservation du gène entre les espèces de Plasmodium. La construction d'un modèle 3D de la protéine par homologie de structure et une étude phylogénique ont été réalisées. Le positionnement des mutations sur le modèle 3 D confirme la faible implication de la plupart des mutations au niveau fonctionnel et structural. Nos résultats suggèrent que si la FeSOD n'est pas un bon marqueur de divergence inter-spécifique, elle représente par contre une cible parasitaire intéressante, de part son existence chez toutes les espèces plasmodiales humaines et sa forte conservation en termes de séquence et de structure.

BAERT C.B., DELORON P., VISCOGLIOSI E., DELGADO-VISCOGLIOSI P., CAMUS D., DIVE D.1999.  Cloning and characterization of iron-containing superoxide dismutase from the human malaria species Plasmodium ovale, P. malariae and P. vivax. Parasitol. Res. 85,1018-24
BAERT C.B., DELORON P., VISCOGLIOSI E., DAUCHEZ M., CAMUS D., DIVE D. 1999. Analysis of genetic diversity at the iron-containing superoxide dismutase locus in Plasmodium falciparum wild isolates. FEMS Microbiol. Lett.,181, 237-43

Auteur: Fabien CORBIER
Lab.: Parasitologie et Immunologie, DRIM, UNIVERSITE MONTPELLIER II (Dir. Thèse: B. Romestand) Date: 22.11. 2000
Rôle des protéases et des lectines dans les interactions hôte/parasite entre Crassostrea gigas (huître du Pacifique) et Perkinsus marinus (protozoaire, Dinoflagellé).

Perkinsus marinus (Protozoaire Dinoflagellé) est l'agent pathogène principal de l'Huître américaine Crassostrea virginica. En revanche, l'huître japonaise Crassostrea gigas présente une bien meilleure résistance à ce parasite.
Au cours de cette thèse, des récepteurs glycoprotéiques reconnus par diverses lectines, dont celles de C. gigas, ont été caractérisés et mis en évidence à la surface du trophozoïte (stade parasitaire infectieux). Un immuno-diagnostic permettant le dénombrement des parasites dans des échantillons d'huîtres a été développé. Enfin, les protéases parasitaires, connues pour exercer un effet immuno-suppresseur chez C. virginica ont été partiel-lement purifiées par chromatographie.
Suite à des infestations expérimentales à partir de trophozoïtes cultivés in vitro, nous avons déterminé que C. gigas présente une rapide augmentation de son activité anti-protéasique plasmatique, qui précède la chute de la charge parasitaire. Cette chute est corrélée à l'augmentation du titre en hémagglutinines et correspond également à l'augmentation de la synthèse d'une lectine capable de se fixer au trophozoïte. En nous basant sur ces résultats et sur les travaux réalisés par d'autres équipes, nous avons élaboré un modèle d'interactions hôte/parasite qui constitue le premier du genre dans le cadre du système Crassostrea spp./Perkinsus marinus. Contrairement à Crassostrea virginica, C. gigas est en effet capable de produire une réponse anti-protéasique efficace contre  les protéases parasitaires. Ces anti-protéases, en inactivant les protéases parasitaires, limitent la prolifération du parasite et préservent l'efficacité des autres effecteurs de l'immunité dont notamment les lectines et les hémagglutinines. Ces dernières peuvent ainsi accélérer l'élimination des parasites selon un mécanisme classique d'opsonisation. Ainsi, comme pour le système Schistosoma mansoni/Biomphalaria glabrata, la résistance de C. gigas semble conditionnée par sa réponse anti-protéasique.

Auteur: Huguette ABESSOLO
Lab.: INSERM U167 , INSTITUT PASTEUR, LILLE, et Laboratoire de Synthèse Organométallique, Univ. Sciences et Technologies de LILLE1, (Dir. Thèse: D. Dive, J. Brocard). Date: 30.11.2000.
Synthèse, Activité antipaludique et mécanisme d'action d'analogues métallocéniques de la chloroquine.

Le paludisme, causé par un protozoaire du genre Plasmodium, demeure la première endémie tropicale. L'extension de la résistance de Plasmodium falciparum aux antipaludéens existants et le manque de vaccin, rendent nécessaire et urgent le développement de nouvelles molécules antimalariques.
De nouveaux composés métallocéniques inspirés de la chloroquine, principal médicament antipaludique, ont été synthétisés par greffage d'un noyau ferrocénique. Deux d'entre eux, la 7-chloro-4[N',N'-Diethylaminomethyl)-N ferrocényl-méthylamino]-quinoléine 1 (ferroquine), et la chloro-4[N'-méthyl,N'-éthylaminomethyl)-N ferro-cénylméthylamino]-quinoléine 3, ont montré une activité antipaludique intéressante sur P. falciparum. La ferroquine a été choisie pour l'étude du mécanisme d'action.
Les effets ultrastructuraux et la localisation ont été étudiés dans des parasites traités par la ferroquine. L'activité inhibitrice sur la polymérisation de l'hème, principal mode d'action de la chloroquine, et l'interaction entre l'hème et la ferroquine, ont été également abordées.

Auteur: Delphine GERBOD
Lab.: LBP, UMR CNRS 6023, UNIV. B. PASCAL, Clermont-Ferrand. et INSERM U 167 INSTITUT PASTEUR LILLE (Dir. Thèse : E. Viscogliosi) Date: 1.12.2000.
Phylogénies d'un groupe de protistes, les Parabasala, basées sur différents indicateurs moléculaires.

Une phylogénie moléculaire, englobant toutes les séquences des gènes d'ARNr 16S de Parabasala disponibles dans les bases de données et celles que nous avons obtenu pour Trichomitus batrachorum, Tetratrichomonas gallinarum, Pentatrichomonas hominis, Histomonas meleagridis et certaines Trichomonadines symbiontes du termite Calotermes flavicollis, a été construite et confrontée à celle établie d'après l'analyse des caractères morphologiques. Dans nos arbres, la position primitive de certaines Hypermastigines retourne la polarité traditionnellement admise pour ce groupe de protistes allant du plus simple vers le plus compliqué. Notre analyse remet aussi en cause la taxonomie actuelle puisque la plupart des classes et des familles de Parabasala représentées ne forment pas de groupes monophylétiques. D'autres observations peuvent être tirées de nos
arbres, comme la perte secondaire de certaines structures cytosquelettiques chez toutes les Monocercomonadidae étudiées, l'existence de formes secondairement libres et l'absence de co-évolution entre les Parabasala et leurs hôtes respectifs. Une phylogénie moléculaire, basée sur la comparaison des séquences de fumarase de classe II, incluant celles obtenues pour cinq espèces de Trichomonadines, Trichomonas vaginalis, Tetratrichomonas gallinarum, Tritrichomonas foetus, Monocercomonas sp. et Trichomitus batrachorum, a aussi été proposée. Dans notre arbre, les Trichomonadines forment, de façon inattendue, un groupe polyphylétique. Les séquences des gènes de Trichomonadines se groupent avec des homologues bactériens et divergent profondément de celles des autres eucaryotes qui sont d'origine mitochondriale. Bien qu'étant probablement secondairement dépourvus de mitochondries, les Trichomonadines ont donc acquis leurs gènes de fumarase de classe II par un mécanisme différent de celui des autres eucaryotes. Différents scénarios évolutifs sont alors proposés.

DELGADO-VISCOGLIOSI P., VISCOGLIOSI E., GERBOD D., KULDA J. SOGIN M.L., EDGCOMB V.P. 2000. Molecular phylogeny of parabasalids based on small subunit rRNA sequences, with emphasis on the Trichomonadinae subfamily. J Euk Microbiol., 47, 70-75.
GERBOD D., EDGCOMB V.P., NOEL C., DELGADO-VISCOGLIOSI P., VISCOGLIOSI E. 2000. Phylogenic position of parabasalid symbionts from the termite Calotermes flavicollis based on small subunit rRNA sequences. Intern. Microbiol., 3,165-172.

Auteur: Sarah BONNET
Lab.: Ecologie des insectes vectoriels, INSTITUT PASTEUR, PARIS, (Dir. Thèse: C. Bourgouin). Date: 21.11.2000.
Transmission de Plasmodium faclciparum de l'homme au moustique: outils de mesure et mécanismes potentiels de blocage.

Face à la situation de l'endémie palustre dans le monde, il est urgent de développer de nouvelles voies de recherche pour lutter contre cette maladie. Dans ce but, nous nous sommes intéressés à la transmission palustre de l'Homme au moustique et au développement du parasite dans son vecteur, dont les modalités restent peu explorées à l'heure actuelle. Notre étude aborde différents aspects de la transmission de Plasmodium falciparum à l'aide d'études épidémiologiques réalisées en zone d'endémie palustre (Cameroun) et d'analyses moléculaires réalisées en laboratoire.
La compréhension de l'épidémiologie du paludisme et l'évaluation de l'efficacité de moyens de lutte dans une zone donnée, impliquent de définir tous les paramètres caractérisant l'endémie palustre. Dans la zone étudiée, nos résultats montrent l'existence d'une transmission modérée avec des variations saisonnières, un taux de morbidité variant de 0,17 à 0,5 accès palustre/an/personne, et un niveau élevé de chimiorésistance. L'évaluation et la comparaison dans deux villages et à des saisons différentes, de la transmission de l'Homme au moustique ont d'une part, montré que cette dernière était modérée et d'autre part, permis de suspecter l'existence d'une immunité bloquant la transmission (TBI) dans l'un des villages. Des expériences d'infection de moustiques avec ou sans remplacement du sérum autologue par du sérum non immun, ont en effet montré que, dans ce village, 44 % des porteurs de gamétocytes possédaient un sérum capable de diminuer la transmission, voire de la bloquer.
La mise en évidence de moyens fiables de mesure de la transmission de l'Homme au moustique est indispensable. Nos résultats ont permis de valider la technique de gorgement sur membrane par rapport à la technique de gorgement direct sur la peau, pour évaluer le pouvoir infectieux des individus. L'utilisation de différents indices d'évaluation de la transmission, jamais comparés jusqu'ici, nous a amenés à conclure que la prévalence de porteurs de gamétocytes et le pourcentage d'individus infectieux ne permettent de refléter que de grandes différences épidémiologiques. En revanche, l'estimation de la probabilité de repas sanguins infectants pour les moustiques est beaucoup plus sensible pour différencier des zones proches ou des saisons différentes. Le pouvoir infectant d'un gamétocyte, quant à lui, semble le plus adapté pour refléter des phénomènes de blocage de la transmission comme la TBI.
Le blocage de la transmission palustre peut s'envisager grâce à l'identification de cibles présentes chez le moustique et impliqués dans le développement du parasite dans celui-ci. Dans ce but, nous avons identifié des gènes d'An. gambiae dont l'expression est régulée par la présence de P. falciparum dans le repas sanguin, grâce à la technique de "differential display". Parmi les gènes sélectionnés, 12 représentent de nouveaux gènes d'An. gambiae, dont un gène codant pour une profiline. L'expression de 4 gènes est spécifiquement régulée par la présence des gamétocytes, reflétant ainsi les interactions spécifiques qui existent entre le parasite et son vecteur naturel. Des études complémentaires permettront d'établir si ces gènes sont impliqués dans des réactions de défense de l'insecte ou directement dans le développement sporogonique du parasite.

GOUAGNA L.C., BONNET S., GOUNOUE R., TCHUINKAM T., SAFEUKUI I., VERHAVE J.P., ELING W., BOUDIN C. 1999. The use of anti-Pfs 25 monoclonal antibody for early determination of Plasmodium falciparum oocyst infections in Anopheles gambiae: comparison with the current technique of direct microscopic diagnosis. Exp. Parasitol. , 92, 209-14
BONNET S., GOUAGNA L.C., SAFEUKUI I., MEUNIER J.Y., BOUDIN C. 2000. Comparison of artificial membrane feeding with direct skin feeding to estimate infectiousness of Plasmodium falciparum gametocyte carriers to mosquitoes. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg., 94,103-6

Auteur: Pierre BUFFET
Lab.: Unité de Biologie des Interactions Hôte-Parasite, INSTITUT PASTEUR, PARIS (Dir. Thèse: A. Scherf) Date: 18.12.2000.
Molécules de surface de l'hématie parasitée par Plasmodium falciparum impliquées dans la physiopathologie du paludisme gestationnel.

L'adhérence des hématies parasitées par P. falciparum (HP) à des récepteurs endothéliaux humains est un élément clé de la physiopathologie du paludisme. La séquestration des HP pendant la deuxième moitié du cycle intra-érythrocytaire est liée à l'expression de la protéine parasitaire polymorphe PfEMP1 (spécifiée par la famille multigénique var). La séquestration placentaire des HP pendant la première grossesse, par adhérence sur la chondroïtine sulfate A (CSA), permet la prolifération d'un nouveau variant antigénique. Ce paludisme gestationnel entraîne une anémie maternelle et une mortalité infantile accrue.
La sélection in vitro de populations parasitaires isogéniques de phénotype de cytoadhérence défini, nous a permis de montrer que la régulation
d'expression de la famille var est épigénétique (commutation in situ), et que le contrôle transcriptionnel en deuxième moitié de cycle est
mutuellement exclusif : une population de phénotype défini n'exprime qu'un seul gène var.
Le ligand protéique exprimé par une population adhérant exclusivement à la CSA, est un membre unique de la famille PfEMP1. L'expression des 8 domaines de cette protéine à la surface de cellules CHO a permis d'identifier le domaine impliqué dans l'interaction avec la CSA : le DBL3g.
Nous avons participé à la description récente de la cytoadhérence d'HP en première moitié de cycle. Ce nouveau phénotype, bien que lié à la cytoadhérence des HP sur la CSA en deuxième moitié de cycle, est opéré par un couple récepteur endothélial/ligand parasitaire encore inconnu. Deux nouvelles protéines parasitaires immunogènes, présentes à la surface des HP uniquement en première moitié de cycle (RSP-1 et RSP-2) sont les opérateurs putatifs de la cytoadhérence en première moitié de cycle et expliqueraient la discordance entre les densités parasitaires placentaire (élevée) et périphérique (faible ou nulle) pendant la grossesse.
Ces résultats renforcent et affinent la modélisation physiopathologique du paludisme gestationnel, et font espérer le développement d'un vaccin protégeant mère et futur enfant contre ses conséquences néfastes.

BUFFET P.A., GAMAIN B., SCHEIDIG C., BARUCH D., SMITH J.D., HERNANDEZ-RIVAS R., POUVELLE B., OISHI S., FUJII N., FUSAI T., PARZY D., MILLER L.H., GYSIN J., SCHERF A.1999. Plasmodium falciparum domain mediating adhesion to chondroitin sulfate A: a receptor for human placental infection. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A,96,12743-8
POUVELLE B., BUFFET P.A., LEPOLARD C., SCHERF A., GYSIN J. 2000. Cytoadhesion of Plasmodium falciparum ring-stage-infected erythrocytes. Nat. Med., 6,1264-8

L'apicoplaste, un organite présent chez les parasites Apicomplexa, fait l'objet de nombreuses analyses depuis qu'il a été observé au niveau structural. Outre une revue (Mc Fadden GI, Roos DS, 1999, Apicomplexan plastids as drug targets, Trends Microbiol.,  7, 328-333), une publication récente, objet d'un commentaire, doit retenir notre attention. Surolia N. et al., 2001, Triclosan offers protection against blood stages of malaria by inhibiting enoyl-ACP reductase of Plasmodium falciparum, Nature Med.,  7, 167-173. Un autre éditorial "point de vue" mérite aussi notre attention: Beeson JG. et al., 2001, New agents to combat malaria, Nat. Med.,  7, 149-150.

   Mobilité des cellules eucaryotes.

Que la cellule se déplace en glissant sur tout substrat solide (gliding motility) ou se déplace en rampant (crawling motility), opèrent des complexes supra-moléculaires dont les molécules clés sont l'actine et une des Myosines. Parmi les très nombreuses revues récentes qui rendent compte des propriétés de l'actine, des myosines, doivent retenir l'attention critique les suivantes: Pollard TD et al. 2000. Molecular mechanisms controlling actin filament dynamics in non muscle cells. Ann. Rev. Biophys.Biomol.Struct., 29, 545-576, un numéro entier de Methods 2000, 22 "Motors".

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